1. 产品描述：

信励致和^®2×超敏型通用染料法qPCR预混液(含示踪剂)是使用 SYBR Green I嵌合荧光法进行 qPCR 反应的专用预混液。具有特异性强、检测灵敏度高、扩增产量高等诸多优点。产品中含有特殊的 ROX Reference Dye，适用于所有 qPCR 仪器，无需在不同仪器上调整 ROX 的浓度。本产品为浓度2×的预混液，使用时只需添加模板、引物和 ddH₂0，使 Mix 作浓度为1×即可。

2. 产品特点：

（1）一管预混操作方便。

（2）高灵敏度、高特异性。

（3）适用多种物种来源DNA扩增。

1. 产品组分:

2. 储运条件:

-25~-15℃避光保存，保质期12个月，干冰运输。

3. 注意事项：

（1）本产品避免反复冻融，以免酶活下降。如每次使量较少，推荐少量分装使用。

（2）使前请上下颠倒以混匀Mix，请勿vortex以免产过多泡引起反应体系体积失准，影响定量结果。

（3）由于本品中含有荧光染料SYBR Green I，因此无论保存Mix还是配制反应体系时都应该尽量避免强光照射。

（4）本品灵敏度极高，即使空中微量的 DNA 气溶胶都能引起污染，导致实验失败。配制反应体系时请于超净工作台内进行，配制过程中请使用无菌无酶枪头、反应管，条件容许的实验室推荐使用专用的移液器、带滤芯的枪头，避免交叉污染。

（5）仪器类型不同，熔解曲线采集程序不尽相同，使用仪器默认熔解曲线采集程序即可。

灵敏度检测：

在4种模板浓度条件下，分别使用信励致和^®2×超敏型通用染料法qPCR预混液(含示踪剂)与竞品进行荧光定量PCR实验对比结果,可以看到，本品相较具有更小的CT值，检测灵敏度更佳。

1. 无Ct数值或数值偏大？

原因分析：模板浓度过低或降解；模板纯度质低，蛋白质、盐等杂质会影响PCR扩增和荧光检测；引物扩增效率低；反应循环数不够；qPCR体系污染；存在引物二聚体。

解决方案：适当增加模板量，检查模板是否降解，使用新鲜制备的模板；重新制备高质量的模板或对模板进稀释，降低杂质浓度；重新设计高质量引物；循环数一般设置为40；使用RNase/DNase-free耗材；进行熔解曲线分析，结合浓度琼脂糖凝胶电泳辅助判断是否为二聚体，若是则需重新设计引物。

2. Ct值重复性差？

原因分析：Ct值重复性较差一般是由加样误差；仪器误差导致。

解决方案：建议使用优质耗材与移液器，避免加样挂壁，模板浓度不宜过高；选择适用仪器，定期校准。

3. 熔解曲线多峰?

原因分析：存在引物二聚体；非特异性扩增；基因组污染。

解决方案：进行熔解曲线分析，结合浓度琼脂糖凝胶电泳辅助判断是否为二聚体，若是则需重新设计引物；设置引物特异性高的引物，可有效减少非特异性扩增；去除基因组DNA，或跨内含子设计引物。

4. 熔解曲线单峰但峰不尖？

原因分析：存在大小相近的非特异性扩增，起峰、落峰温度跨度较大。

解决方案：重新设计引物。