1. 产品描述：

信励致和^®多片段无缝克隆试剂盒是基于同源重组原理开发的一步法单片段/多片段通用型无缝克隆试剂盒，属于非连接酶依赖型体系，载体自连背景极低。高度优化的2×多片段无缝克隆混合液含有增强型重组酶和重组反应所需缓冲液，可显著提高克隆的重组效率及对杂质的耐受程度，因此制备的高纯度线性化载体和插入片段可不纯化直接用于重组克隆，大大简化了实验操作。

本试剂盒可以将含有载体末端重叠区域的插入片段定向重组至任何载体的任何位点，不受酶切位点限制（特殊情况，如有毒基因的克隆或插入外源DNA后导致质粒本身不稳定等除外），可以插入单个片段，也可以一次插入多至6个顺序拼接的片段，载体末端与插入片段末端以及相邻插入片段末端之间需15~25 bp能够相互同源重组的完全一致的序列。插入片段和线性化载体在重组酶作用下，仅需37℃反应5~30 min即可完成重组，重组产物不依赖连接酶直接转化至感受态细胞，所获得的阳性克隆率在95%以上。

2. 产品特点：

（1）可在5~30 min内完成重组；

（2）不受酶切位点限制，无需对片段酶切；

（3）可实现1~6个片段同时定向构建进入载体；

（4） 不引入额外序列。

1. 产品组分：

2. 储运条件：

该试剂盒于-25~-15℃条件下可保存24个月，干冰运输。

3. 注意事项：

（1）片段扩增用模板、引物、线性化载体、高保真聚合酶、感受态细胞、ddH₂O需要自备。

（2） 使用单酶切制备载体时，部分限制性内切酶产生粘性末端，导致线性化的载体转化大肠杆菌后在菌体内获得修复，长出假阳性克隆。针对这种情况，建议使用双酶切、或加大验证的克隆数量。酶切制备的线性化载体不能进行DpnI处理。

（3）由于重组反应体系中含有盐离子，反应产物不可以直接电击转化。若需要电击转化，则需要对反应产物进行脱盐处理。由于用于反应的DNA很少，不推荐使用乙醇沉淀或者胶回收，可使用适合微量DNA透析的滤膜进行脱盐处理。

（4） 本产品仅供科研使用。

连接效果测试：

使用本品将3个目的基因片段连接入载体，连接产物转入DH5α化学感受态细胞，相比竞品阳性率更高。结合质粒酶切后电泳的验证结果来看，质粒构建成功率可达95%以上。