1. DNA产量低?
原因分析:样本被反复冻融;样本裂解不充分;革兰氏阳性菌破壁不完全;蛋白酶K活性下降;洗脱效率低;
解决方案:避免反复冻融样本,推荐使用新鲜样本或只冻融过一次的样本;加入裂解液、蛋白酶K后充分混匀,适当延长裂解时间;可适量增加溶菌酶的用量或延长其消化时间;更换新的蛋白酶K,使用后必须保存于2~8℃;将洗脱液可提前预热至55℃,滴加于吸附柱膜中央位置,增加洗脱体积或洗脱次数。
2. DNA纯度低?
原因分析:杂蛋白污染;盐离子污染;RNA残留;乙醇残留。
解决方案:未使用缓冲液WA漂洗,或缓冲液WA中未加入正确体积的无水乙醇。请按瓶身说明添加无水乙醇;未使用缓冲液WB漂洗,或漂洗次数不够。请按说明书使用缓冲液WB漂洗两次;RNase A孵育时间过短,降解不完全。对于RNA含量较多的样品可适当延长孵育时间;请按说明书空管离心后开盖室温放置2~5min,让乙醇彻底挥发。