1. 产物没有或很少?
原因分析:模板浓度过低;实验样品DNA损伤或降解;PCR条件未优化;退火温度过高;延伸时间太短;循环次数太少;引物设计不完善;引物浓度过低;Mg2+浓度未优化;模板质量太差。
解决方案:建议DNA样品不要反复冻融,以免造成DNA的损失;优化PCR条件,对于基因片段较长的片段适当增加延伸时间,增加循环数。
2. 产物为多条带?
原因分析:引物浓度为优化或者引物降解;退火温度过低。
解决方案:建议将引物置于4℃或者-20℃保存;适当调整退火温度。
3. 产物有污染?
原因分析:模板用量过多;Mg2+浓度未优化;PCR中的长片段来源于长的基因组DNA。
解决方案:适当减少模板用量;尽量使用杂质含量少的模板进行扩增。